單細(xì)胞的分離是單細(xì)胞測(cè)序領(lǐng)域的一個(gè)新嘗試，利用單細(xì)胞分離儀的應(yīng)用來(lái)篩選目的B細(xì)胞并進(jìn)行測(cè)序，為發(fā)現(xiàn)新的抗體藥物邁出了重要的一步。

　　作為全基因組測(cè)序的一種方法，單細(xì)胞RNA測(cè)序被廣泛地應(yīng)用于單細(xì)胞水平面上來(lái)識(shí)別細(xì)胞的類型和變異狀況。利用細(xì)胞標(biāo)記CD27和細(xì)胞活性染料的單細(xì)胞分離設(shè)備，能夠分離出單個(gè)活性的B細(xì)胞，從而對(duì)分離的單細(xì)胞基因狀況進(jìn)行分析表達(dá)，并與靜息記憶的B細(xì)胞進(jìn)行比較，可在單細(xì)胞水平研究基因表達(dá)上發(fā)現(xiàn)差異化。

　　在mCD40L-3T3中批量刺激人的幼稚記憶B細(xì)胞培養(yǎng)6天。采集CD27-PE和CellTrackerGreen對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色。對(duì)PE/FITC雙陽(yáng)性細(xì)胞的篩選應(yīng)用單細(xì)胞分離儀，單細(xì)胞可被分選至96孔聚合酶鏈反應(yīng)板內(nèi)，在進(jìn)行分離之前，4ul/孔裂解物被預(yù)先放置在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)板上，經(jīng)cDNA合成分析，其中百分之97為單細(xì)胞分離。

　　其次，通過(guò)擴(kuò)大VH和VL抗體的變化區(qū)域的特異性基因或全轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)制備的二代測(cè)序獲得序列，參照靜息記憶b細(xì)胞BCR抗體表現(xiàn)資料組進(jìn)行比較分析b細(xì)胞激活基因的差異c每個(gè)孔只有一套BCR轉(zhuǎn)錄本，而通過(guò)測(cè)序分析確定VH和VL抗體的質(zhì)量充分表明只有一個(gè)細(xì)胞被分入了PCR管。

　　綜上所述，被分離出的單細(xì)胞的效率同時(shí)也證實(shí)了經(jīng)過(guò)預(yù)處理和設(shè)門標(biāo)準(zhǔn)所獲取的B細(xì)胞是活性的。

　　此外，分離出的單細(xì)胞cDNA還可應(yīng)用于隨后的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)制備和其免疫球蛋白輕重鏈可變區(qū)域的完整PCR。單細(xì)胞分離儀還提供了一個(gè)全新的桌面型單細(xì)胞分離平臺(tái)，能夠與下游的單細(xì)胞測(cè)序分析試驗(yàn)進(jìn)行無(wú)縫對(duì)接。